УДК 638.153.3
Нозематоз — инфекционное заболевание взрослых пчел, вызываемое микроспоридиями рода Nosema, паразитирующими в эпителиальных клетках средней кишки [5].
Изучение биологии возбудителя и эпизоотологии заболевания было начато после описания болезни немецким исследователем Е. Zander в 1909 г., который в стенке желудка зараженных пчел обнаружил овальные тельца. Он дал паразиту видовое название Nosema apis, а заболевание назвал «ноземной болезнью» [10]. В России нозематоз выявил профессор Г.А. Кожевников в 1913 г. на Измайловской пасеке [3]. В 1994 г. шведский исследователь I. Fries посетил Китай, где в семьях Apis ceranae обнаружил и описал новый вид микроспоридии — N. ceranae [6].
Проведенная в 2020 г. филогенетическая ревизия родов Nosema и Vairimorpha показала, что микроспоридий, возбудителей нозематоза, корректнее относить к роду Vairimorpha [13]. Микроспоридий — внутриклеточных, спорообразующих паразитов — ранее считали простейшими, современная систематика относит их к царству грибов. В связи с этим нозематоз — грибная инфекция. Следует учитывать, что сейчас в зарубежной научной литературе данных возбудителей часто называют Vairimorpha apis и V. ceranae,а само заболевание вайриморфозом.
Заражение происходит при попадании спор ноземы вместе с кормом в среднюю кишку пчел. Там под воздействием пищеварительных ферментов из споры выбрасывается полярная трубка, по которой и зародыш проникает в эпителиальные клетки средней кишки, где в протоплазме или в ядре происходит его вегетативное размножение. Полный цикл развития паразита длится 72 ч и заканчивается разрушением эпителиальных клеток и выходом новых спор ноземы в просвет кишечника. В результате поражения эпителиальные клетки отторгаются, у пчел нарушаются процессы переваривания и всасывания питательных веществ, атрофируются верхнечелюстные и глоточные железы. Дегенеративным изменениям также подвергаются жировое тело, ректальные железы, яичники маток, семенники трутней. Пораженные матки снижают яйцекладку, медленно передвигаются внутри гнезда, часто погибают или заменяются пчелами. Очень часто причиной не приема и быстрой смены молодых плодных маток является поражение их нозематозом [9, 12].
Во внешней среде возбудитель сохраняется в виде спор. По данным исследователей, в трупах пчел споры могут сохраняться до 5–6 лет; в сотах — от 3 до 24 мес; в меде при комнатной температуре — более 12 мес. В воде при 65°С споры погибают через 10–15 мин, при 100°С — через 1–5 мин [7, 11].
Внешние признаки поражения пчел нозематозом неспецифичны, клинические признаки заболевания в условиях средней полосы России можно наблюдать еще в период зимовки, так как микроспоридии начинают усиленно размножаться с началом яйцекладки маток и повышения температуры внутри гнезда. Заболевшие семьи плохо зимуют, издают повышенный гул, пчелы активны и беспокойны, вылезают из летков. На летках и передних стенках ульев видны следы экскрементов. Весенний очистительный облет пчел слабый, не дружный. У больных особей увеличено брюшко, наблюдаются диарея, дрожание крыльев, беспокойство, увеличенное потребление корма и жажда. Заболевшие семьи ослабевают, плохо развиваются, происходит постоянное уменьшение особей в гнездах [1, 8].
Следует отметить, что диарея у пчел может быть вызвана и другими причинами: недоброкачественными кормами, повышенной влажностью в ульях, беспокойством зимой и прочими заболеваниями. Поэтому важно учитывать условия зимовки пчел и отличать нозематоз от сальмонеллеза, амебиаза, колибактериоза, падевого токсикоза и незаразного поноса.
Для установления диагноза на нозематоз нужны лабораторные исследования. Они включают: отбор проб, световую микроскопию и при необходимости проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР исследования) для видовой идентификации возбудителей.
Отбор патологического материала должны проводить специалисты ветеринарной службы — не менее чем от 10% семей, находящихся на пасеке, а также от каждой пчелиной семьи с клиническими признаками заболевания. Для этого отбирают по 20–30 живых или погибших пчел. Живых пчел отбирают с летков или крайних гнездовых рамок, погибших (подмор) — со дна улья.
Для получения официальных результатов пробы направляют на исследование в лабораторию или испытательный центр, входящие в систему Государственной ветеринарной службы Российской Федерации, либо в иную лабораторию, аккредитованную в национальной системе аккредитации. Следует отметить, что диагностика нозематоза не представляет особой сложности, ее может выполнить и пчеловод, если у него имеется необходимое оборудование.
Исследования пчел, пораженных нозематозом, проводили в лаборатории ветеринарной санитарии и экологической безопасности в пчеловодстве ВНИИВСГЭ — филиала ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН, а также на экспериментальной пасеке института. Методическую часть выполняли в соответствии с основными требованиями к постановке экспериментов в пчеловодстве, методиками, опубликованными в отечественной и зарубежной литературе, а также подходами, разработанными применительно к решению задач исследований [3, 4].
Для обездвиживания живых пчел предварительно помещали в морозильную камеру на 15–20 мин. Далее пинцетом аккуратно вытаскивали жалоносный аппарат, а вместе с ним прямую и среднюю кишку. Последнюю тщательно осматривали. (Средняя кишка пораженных нозематозом пчел имеет серо-молочный цвет, увеличена по длине и в диаметре, у нее исчезает поперечная исчерченность, ткань дряблая, легко рвется.)
Отделенную среднюю кишку помещали в ступку, добавляли равное по объему количество дистиллированной воды и тщательно растирали пестиком до образования гомогенной взвеси. Каплю полученной суспензии помещали на предметное стекло, накрывали покровным и изучали под световым микроскопом при увеличении х400 в слегка затененном поле (рис. 1, а—д). При исследовании подмора препарировали брюшки погибших пчел.
Споры ноземы хорошо видны в поле зрения микроскопа в виде овальных просвечивающихся телец, похожих на рисовые зерна. При диагностике нозематоза отмечали три степени поражения: слабую — до 100 спор, среднюю — до 1000, сильную — более 1000 спор. При слабой степени поражения пчелиную семью считали условно здоровой и над ней устанавливали усиленный ветеринарный контроль. При средней и сильной степени семьи считали больными нозематозом.
В пчеловодных чатах иногда встречается утверждение, что при световой детекции можно легко отличить споры двух видов ноземы (например, споры N. арis немного крупнее, более овальные и заметно «толще»), но это лишь общая информация. Световая микроскопия не позволяет достоверно идентифицировать возбудителей. С этой целью применяют специальные методы исследования: электронную микроскопию и молекулярно-генетические методы, в частности ПЦР-анализ [2].
В марте 2025 г. на экспериментальной пасеке института, расположенной в Московской области и насчитывающей 20 пчелиных семей карпатской породы, обнаружили 3 семьи, пораженные нозематозом. Из них сформировали опытную группу (n = 3) для дальнейшего изучения.
Для идентификации вида возбудителей нозематоза провели исследование методом ПЦР-РВ (в реальном времени) с использованием видоспецифичных праймеров. Синтезировали праймеры в компании «СИНТОЛ» (Москва). Всего изучили 6 проб гомогената средних кишок пчел, пораженных нозематозом (5 проб — из живых особей, 1 проба — из подмора). Учет результатов проводили по анализу накопления ДНК N. Apis и N. ceranae (рис. 2, табл. 1).
Содержание ДНК N. ceranae было выше, чем ДНК N. apis. Сходная картина наблюдалась на экспериментальной пасеке в 2012 г., когда мы проводили ПЦР-исследования и разрабатывали методические указания [2]. Таким образом, на пасеке N. ceranae обнаруживается в ассоциации с N. apis, не вытесняя последнюю.
Чтобы изучить роль разных факторов, влияющих на возникновение и развитие нозематоза, необходимо выяснить основные закономерности поражения этим заболеванием в течение годового жизненного цикла семьи при одинаковых условиях ухода, содержания и кормления. С этой целью на экспериментальной пасеке ежемесячно (кроме зимнего периода — декабрь, январь, февраль) исследовали пробы живых пчел из опытных и контрольных семей.
Следует отметить, что в средней полосе эпизоотическая динамика нозематозной инфекции тесно связана со временем года. Во всех семьях опытной группы среднее поражение регистрировали в марте, сильное — в апреле—мае, после чего инфекция резко шла на спад, в летние и осенние месяцы она не отмечалась. Это можно объяснить заменой старых зимовалых пчел молодыми особями летней генерации, имеющих естественную устойчивость к поражению нозематозом. В семьях контрольной группы споры ноземы обнаружены не были. В южных регионах страны сезонность нозематоза выражена не так явно.
Существует много научных публикаций о том, что заражение N. ceranae может вызывать синдром массовой гибели пчел. Поэтому следующим этапом нашей работы стало изучение влияния микроспоридий, в том числе и N. ceranae, которая доминирует на экспериментальной пасеке, на жизнедеятельность и продуктивность пчелиных семей. С этой целью контролировали следующие производственные показатели контрольных и опытных семей: силу, число отстроенных рамок с вощиной и количество собранного меда (табл. 2).
В весенний период семьи опытной и контрольной групп были практически аналогичны по количеству меда и числу рамок. Численность пчел контрольной группы в среднем на 43% превышала опытную. По окончании пчеловодного сезона показатели опытной группы не отличались от показателей контрольной. При этом массовая гибель и слет пчел не отмечались.
Получается, что сам по себе нозематоз не такое опасное заболевание, но только если оно не осложняется вторичными инфекциями и инвазиями, а также падевым токсикозом. При сочетанных заболеваниях, в частности, с опасными вирусными инфекциями, при ослаблении иммунного статуса пчел и разрушении перитрофической мембраны в средней кишке (при потреблении падевого меда) нозематоз может регистрироваться в летний период и вызывать постоянную гибель летных пчел, что наблюдалось в 2025 г. в Приморском крае.
Окончание следует
А.Б. СОХЛИКОВ1, Д.В. ГРУЗНОВ1,
О.А. ГРУЗНОВА1,2
1ВНИИВСГЭ — филиал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН,
2ФГБУН ФИЦ химической физики им. Н.Н. Семенова РАН, г. Москва
При диагностике нозематоза на экспериментальной пасеке ВНИИВСГЭ — филиала ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН в Московской области методом ПЦР-РВ выявлены два возбудителя заболевания: Nosema ceranae и Nosema apis. Изучена эпизоотическая динамика инфекции и ее влияние на жизнедеятельность и продуктивность пчелиных семей. В результате лабораторных испытаний установлено, что из тестируемых средств, препятствующих заражению пчел нозематозом, наибольшую эффективность показали тимол и спиртовой экстракт полыни горькой.
Ключевые слова: нозематоз, споры, Nosema ceranae, Nosema apis, ПЦР-РВ, пчелиные семьи.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Сохликов Алексей Борисович, канд. биол. наук, вед. науч. сотр. лаборатории ветеринарной санитарии и экологической безопасности в пчеловодстве, e-mail:
Грузнов Дмитрий Вячеславович, канд. вет. наук, ст. науч. сотр. лаборатории ветеринарной санитарии и экологической безопасности в пчеловодстве, e-mail:
Грузнова Ольга Александровна, канд. биол. наук, ст. науч. сотр. лаборатории жидкофазного окисления, ст. науч. сотр. лаборатории ветеринарной санитарии пчеловодстве, e-mail:
NOSEMOSIS OF BEES: DIAGNOSIS, EPIZOOTIC DYNAMICS, AND TESTING OF CONTROL AGENTS
A.B. Sokhlikov, D.V. Gruznov,
O.A. Gruznova
The RT-PCR method detected two pathogens, Nosema ceranae and Nosema apis, in bees hived in an experimental apiary of the All-Russian Research Institute of Veterinary Sanitation, Hygiene and Ecology in the Moscow Region. The epizootic dynamics of the infection and its influence on the vital activity and productivity of bee colonies were analyzed. Laboratory studies have shown that of the tested agents for preventing infection of bees with nosemosis, thymol and an alcoholic extract of wormwood (Artemisia absinthium) demonstrated the greatest effectiveness.
Keywords: nosema spores, Nosema ceranae, Nosema apis, Real-time PCR, bee families.
Адрес редакции журнала "Пчеловодство":
+7 (499) 270-05-59
