Гнильцовые заболевания пчел наносят огромный ущерб пчеловодству. Они приводят к ослаблению и гибели открытого и печатного расплода. Личинки и куколки погибают, превращаясь в гнилостную массу, отсюда и название «гнильцы». Чтобы снизить опасность распространения этих заболеваний на другие пасеки, необходимо своевременно их диагностировать.
Возбудитель американского гнильца пчел Paenibacillus subsp. larvae не культивируется на обычных питательных средах, так как для его роста и спорообразования необходимы ростовые добавки. В нашей стране, как и за рубежом, для выделения, культивирования и сохранения в музейных условиях Р. subsp. larvae широко используются среды Бейли, Томашеца, Уиллиса-Гобза. Однако среда Бейли имеет недостатки. Для обеспечения первичного роста культур необходимо вносить несколько миллионов споров. На среде Томашеца возбудитель американского гнильца не всегда хорошо растет и практически не образует спор. Для поддержания культуры необходимы регулярные пересевы через 2 недели.
На питательной среде Уиллиса-Гобза вегетативный рост американского гнильца наблюдается на вторые сутки, а спорообразование — через 6-7 дней. Питательная среда Уиллиса-Гобза обеспечивает длительность хранения возбудителя заболевания без пересевов до 1,5 месяца.
Перед нами была поставлена задача изыскать полноценную питательную среду для культивирования возбудителей гнильцовых болезней пчел, которая по ростовым свойствам превосходила бы ранее используемые, была дешевле и проста в изготовлении. Таким требованиям отвечает питательная среда на основе казеинового гидролизата (глубокого расщепления).
Питательную среду готовили разведением концентрата (общий азот 1057 мг%, рН 1,6) в 8 раз дистиллированной водой (на 1 л добавляли 20 г архангельского агар-агара, рН 6,8–7,0). Общий азот 120–130 мг%. В состав питательной среды входят 17 аминокислот, она характеризуется высоким содержанием аланина, лейцина, фениланина.
Для изучения биологических свойств возбудителей использовали четыре модификации среды: Бейли, Томашеца, Уиллиса-Гобза, казеиновый гидролизат. В качестве тест-микроорганизмов брали: возбудителя американского гнильца пчел P. subsp. larvae, европейского гнильца Вac. latеrosporus, P. subsp. alvei, Ent. faecalis.
В сравнительном аспекте возбудителя европейского гнильца выращивали на мясопептонных и казеиновых средах.
Наши исследования показали, что питательная среда на основе казеинового гидролизата обладает высокими ростовыми свойствами, так как первичный рост возбудителя американского гнильца появлялся уже через 18–24 ч; спорообразование — через 72 ч (800–1000 спор при внесении 500 тыс. микробных тел); концентрация смывов (накопление биомассы) — 2 млрд микробных тел. Многократные пассажи (10) не изменяли биологических свойств, а жизнеспособность Р. subsp. larvae сохранялась свыше трех месяцев (табл.).
Возбудители европейского гнильца пчел Bac. latеrosporus, P. subsp. alvei, Ent. faecalis хорошо росли на среде из казеинового гидролизата. Первичный рост наблюдался уже через 18–24 ч, накопление биомассы через 24–48 ч достигало 2 млрд/см3 (на мясопептонных средах только 1 млрд/см3). Многократные пассажи (10) не изменяли биологических свойств возбудителей европейского гнильца пчел, цикл пересевов увеличивался, жизнеспособность сохранялась свыше 3 месяцев.
Питательная среда на основе казеинового гидролизата апробирована на 120 штаммах возбудителей с положительными результатами в течение года.
Результаты наших исследований позволяют рекомендовать казеиновый гидролизат в лабораторную практику при бактериологических исследованиях патологического материала из неблагополучных по гнильцовым заболеваниям семей для выделения возбудителей гнильцовых болезней пчел; в диагностическую практику и производство, поскольку среда на основе казеинового гидролизата обеспечивает столь же полноценные результаты, как и ранее используемые среды (по некоторым показателям предлагаемая нами среда превосходила их), но выгодно отличается более простым и дешевым способом изготовления.
И.А.ЛЕОНТЬЕВА
ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р.Коваленко
Адрес редакции журнала "Пчеловодство":
