УДК 638.16
Напомним, что палинология — раздел ботаники, изучающий пыльцу растений и споры грибов, а мелиссопалинология — раздел палинологии, изучающий пыльцу растений, извлеченную из меда и других продуктов пчеловодства. Мелиссопалинология помогает установить ботанический состав меда и его географическое происхождение, выявить фальсификацию продукта и наличие падевых элементов.
Методы мелиссопалинологических исследований. Сегодня мелиссопалинологические исследования проводят по методу, описанному в ГОСТ 31769 — 2012 [2]. На наш взгляд он устарел по ряду причин.
♦ Высокая трудоемкость.
♦ Фенол, применяемый в заливочной среде, — высоко опасное вещество (2-й класс опасности для человека).
♦ Постоянные эталонные микропрепараты пыльцы невозможно изготовлять в лаборатории без специального микроклимата (это особенно актуально для южных регионов и при пересылке в теплое время года). Глицерин-желатиновая заливочная среда требовательна к микроклимату и при 35...40°С становится нестабильной, вытекает из-под покровного стекла, пыльцевые зерна приходят в хаотичное движение, что затрудняет их подсчет.
♦ Глицерин-желатиновая заливочная среда и высокое содержание остаточных сахаров в препарате значительно увеличивают толщину микропрепарата. Это приводит к тому, что нужно постоянно корректировать резкость изображения в микроскопе, тем самым снижая его ресурс и увеличивая продолжительность исследования.
♦ Затруднена идентификация пыльцевых зерен. После переноса осадка на предметное стекло микропрепарат обрабатывают 96%-ным этиловым спиртом, подкрашенным фуксином [1]. В результате окрашиваются не только пыльцевые зерна, но и часть осадочной жидкости (смесь дистиллированной воды и меда), что снижает прохождение света микроскопа через микропрепарат и ухудшает его качество (рис. 1, 2).
Нами был разработан инновационный метод получения высококачественных стабильных микропрепаратов меда, обножки и эталонных пыльцевых зерен. Его преимущества заключаются в следующем.
◊ Устранено влияние токсичных материалов.
◊ Не требуется специальный микроклимат.
◊ Улучшилось прохождение светового пучка микроскопа через предметное стекло.
◊ Увеличился ресурс микроскопа и уменьшилась продолжительность исследования за счет сокращения манипуляций по настройке резкости изображения.
◊ Максимально снизилась концентрация остаточных сахаров в микропрепарате, что позволяет детально изучать экзину пыльцевых зерен и определять наличие искусственных примесей в меде.
◊ Окрашиваются только пыльцевые зерна, а не весь микропрепарат.
◊ Полученные микропрепараты можно перевозить разными видами транспорта и хранить практически в любых условиях, а также дополнять результаты пыльцевого анализа микропрепаратом по желанию заинтересованной стороны.
◊ Подобраны заливочные среды для получения высокостабильных, высококачественных микропрепаратов минимальной толщины.
◊ Кратно снизились затраты труда и трудоемкость.
Для изготовления микропрепаратов требуется следующее оборудование: сушильная камера лабораторная с активным вентилированием; весы лабораторные с точностью ± 0,1 г; центрифуга лабораторная с ускорением 1000 g и пробирками объемом не менее 50 мл; лампа ультрафиолетовая лабораторная; пробирка лабораторная полимерная (50 мл); стакан лабораторный (50–100 мл) либо шприц (не менее 100 мл); дозатор лабораторный (1 мл) или пипетка Пастера (1 мл); водяная баня лабораторная; палочка стеклянная.
Из реактивов и расходных материалов нужны: вода дистиллированная; раствор кислого фуксина по Цилю; заливочная полимерная среда ультрафиолетового отверждения (для цитологических и гистологических исследований); салфетка вискозная; стекло предметное; стекло покровное; спиртовой раствор для очистки стекол.
Последовательность изготовления микропрепарата меда. Из средней пробы отбирают 10 г предварительно перемешанного меда, помещают в пробирку(и) объемом 50 мл, куда добавляют 40 мл дистиллированной воды и 1–2 капли кислого фуксина.
Эти пробирки ставят на водяную баню с температурой 40°С. Разогретый раствор тщательно размешивают до полного растворения меда в пробирке.
Далее пробирки помещают в центрифугу на 10 мин для осаждения пыльцевых зерен. По окончании вращения центрифуги сливают надосадочную жидкость, повторно добавляют 40 мл дистиллированной воды и проводят центрифугирование. Если в образце мало пыльцевых зерен, то надосадочную жидкость можно не сливать.
Осадок из пыльцевых зерен переносят пипеткой Пастера на очищенное спиртом предметное стекло и распределяют их по нему. Предметные стекла ставят в сушильный шкаф и сушат воздушным потоком при температуре 40...50°С до полного высыхания.
В центр покровного стекла наносят заливочную среду и фиксируют его. Сушат микропрепарат под ультрафиолетовой лампой 1–2 мин. Маркируют микропрепарат.
Последовательность изготовления микропрепарата обножки. Предварительно обножку из средней пробы сортируют по цвету. Обножку каждого цвета помещают в отдельную пробирку объемом 50 мл, куда добавляют 40 мл дистиллированной воды, 1 каплю кислого фуксина и тщательно взбалтывают.
Пробирку(и) ставят в центрифугу на 10 мин для осаждения пыльцевых зерен. По окончании вращения центрифуги сливают надосадочную жидкость, добавляют 20 мл дистиллированной воды, проводят повторное центрифугирование в течение 10 мин и вновь сливают надосадочную жидкость.
Пипеткой Пастера осадок из пыльцевых зерен переносят на очищенное спиртом предметное стекло и распределяют их по нему. Предметные стекла ставят в сушильный шкаф и сушат воздушным потоком при 40...50°С до полного высыхания.
В центр покровного стекла наносят заливочную среду и фиксируют его. Сушат микропрепарат под ультрафиолетовой лампой 1–2 мин. Маркируют микропрепарат.
Последовательность изготовления микропрепарата эталонов пыльцевых зерен с пыльников растений. В чистую пробирку объемом 50 мл наливают 20 мл дистиллированной воды. Методом окунания в нее стряхивают пыльцу с пыльников растений, затем добавляют 1 каплю кислого фуксина и тщательно взбалтывают.
Пробирку(и) помещают в центрифугу на 10 мин для осаждения пыльцевых зерен. Затем ставят в центрифугу на 10 мин для осаждения пыльцевых зерен. По окончании вращения центрифуги сливают надосадочную жидкость, добавляют 20 мл дистиллированной воды, проводят повторное центрифугирование в течение 10 мин и снова сливают надосадочную жидкость.
Далее осадок из пыльцевых зерен переносят пипеткой Пастера на очищенное спиртом предметное стекло и распределяют их по нему. Предметные стекла ставят в сушильный шкаф и сушат воздушным потоком при 40...50°С до полного высыхания.
Заливочную среду наносят в центр покровного стекла и фиксируют. Сушат микропрепарат под ультрафиолетовой лампой 1–2 мин. Маркируют микропрепарат.
Этот метод мы апробировали на протяжении 1,5 лет. Впервые он был представлен на конгрессе «Пчела и человек — 2025: Россия и дружественные страны» в конкурсе «Лучшая инновация в сфере пчеловодства — 2024» и был удостоен диплома победителя в номинации «Научная разработка/исследование».
М.А. ОВЧИННИКОВА, С.С. СЕЛИВОШКО
ФГБОУ ВО «Кубанский государственный университет»,
г. Краснодар
Разработан и апробирован инновационный метод изготовления микропрепаратов меда, обножки и эталонной пыльцы растений для мелиссопалинологических исследований. В статье обозначены преимущества нового метода в сравнении с действующим, перечислено необходимое оборудование, изложена последовательность изготовления микропрепаратов.
Ключевые слова: инновационный метод, мелиссопалинология, микропрепарат, мед, обножка, пыльца.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бурмистрова А.Н., Никитина В.А. Медоносные растения и их пыльца. — М., 1990.
2. ГОСТ 31769 — 2012 «Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен».
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Овчинникова Мария Анатольевна, канд. биол. наук, инженер по качеству продуктов пчеловодства, преподаватель кафедры зоологии биологического факультета, мелиссопалинолог, сертифицированный эксперт-дегустатор, e-mail:
Селивошко Сергей Сергеевич, мелиссопалинолог, сертифицированный эксперт-дегустатор, пчеловод, e-mail:
AN INNOVATIVE METHOD FOR MANUFACTURING MICRO-PREPARATIONS FOR MELISSOPALYNOLOGICAL RESEARCH
M.A. Ovchinnikova, S.S. Selivoshko
A method for manufacturing micro-preparations of honey, pollen load and reference pollen for melissopalynological studies has been developed and tested. The advantages of the new method in comparison with the current method are outlined, necessary equipment is listed, and the sequence of manufacturing micro-preparations is outlined.
Keywords: innovative method, melissopalynology, micro-preparation, honey, pollen, pollen.
Адрес редакции журнала "Пчеловодство":
+7 (499) 270-05-59
