Состав микофлоры воздуха у поверхности земли в большей степени определяется местными источниками спор микромицетов. Значительная часть их попадает в воздух с дикорастущих растений. Более вероятно, что источником спор служит поверхностная микофлора — плесени, паразиты растений и другие грибы, обитающие на растениях или на поверхности почвы, снабженные специальными механизмами, с помощью которых они могут выбрасывать свои споры в движущиеся слои воздуха. Известно также, что в почве из грибов преобладают пенициллы и аспергиллы, а в воздухе главенствуют споры грибов Сladosporium (Ф.Грегори, 1964; S.Oliveri, E.Cammaraca, A.M.Greco et al., 1986). Так как в воздушном слое у поверхности земли (уровень расположения ульев) состав воздушных спор определяется поступлением их из местных источников (растения, почва), следует, что загрязнение продуктов пчеловодства спорами грибов неизбежно.
Цель наших исследований — изучение микофлоры воздуха и возможность ее влияния на формирование микобиоты продуктов пчел.
Исследования проводили 27 июня 2007 г. на пасеке ООО «Таежный мед» Залесовского района Алтайского края. Отбор проб продуктов пчел и микологическое исследование воздуха выполняли одновременно. Для исследования контаминации спорами микромицетов воздуха на пасеке использовали естественное оседание спор в чашки Петри со стерильной селективной средой Сабуро. Чашки устанавливали непосредственно на крышу улья, то есть на высоте 1,0–1,2 м от земли, с 11 до 12 ч дня в пяти точках на территории пасеки. Образцы пыльцевой обножки отбирали из пыльцеуловителей, пергу, сотовый мед и прополис — из гнезд пчел.
Для изучения микобиоты продуктов пчеловодства — пыльцевой обножки, перги, меда и прополиса — готовили разведение: 10 г продукта на 90 мл стерильного физиологического раствора — и высевали вглубь агаризованной среды Сабуро.
Инкубирование посевов проводили при 24°С в течение 14 сут. Выросшие колонии микромицетов учитывали на 3-и сутки для дрожжевых организмов и на 5, 7, 10, 14-е сутки для гифальных грибов с последующим пересчетом полученных средних чисел на 1 г исследуемого образца. Выросшие колонии с помощью бинокулярной лупы разделяли на роды по морфологическим особенностям. Несколько колоний каждого типа выделяли в чистую культуру и пересевали на агар Чапека. Видовую идентификацию выделенных изолятов проводили на основании комплекса культуральных и морфологических признаков по определителям (Н.М.Пидопличко, 1972, 1977; В.И.Билай и др.,1988; Д.Саттон и др., 2001).
Обилие представителей вида определяли по процентному содержанию изолятов одного вида по отношению к общему числу изолятов, обнаруженных при высеве продуктов пчел.
Видовую структуру микобиоты изученных продуктов пчел характеризовали по частоте встречаемости представителей выделенных видов и их доминированию. Частоту встречаемости (%) определяли по доле образцов, в которых обнаружен данный вид, от общего числа проанализированных. Частоту доминирования (%) оценивали по доле образцов, в которых данный вид превышал 30% общей численности, от общей численности проанализированных образцов.
Сравнительный анализ микобиоты проводили, рассчитывая индекс видового сходства по Серенсену
2С/(A+B),
где С — число общих видов в сравниваемых ценозах; А и В — число видов в каждом из ценозов.
Методом оседания на чашки Петри из воздуха было выделено 1384 изолята микромицетов, принадлежащих 12 видам, которые были отнесены к 10 родам. Наибольшее количество изолятов принадлежало семейству Dematiaceae — 89,53% и только 10,47% — к семейству Moniliaceae. Максимальное количество спор грибов принадлежало роду Cladosporium — 86,4% (C. cladosporioides — 77,74%, C. herbarum — 8,67%). Споры грибов этого рода легко отделяютcя от конидиеносцев при столкновении с мельчайшими капельками тумана (Ф.Грегори, 1964). Необходимо отметить, что накануне отбора проб с 6 до 9 ч 30 мин на пасеке и в ее окрестностях наблюдался густой туман. В небольших количествах были обнаружены изоляты видов Stemphylium botruosum — 5,13%, Fusarium chlamydosporum — 3,54%, Alternaria alternata — 2,67%. Доля остальных идентифицированных 7 видов варьировала от 0,07% — Penicillium verruculosum до 0,87% — Aureobasidium pullulans.
Интересно, что количественная характеристика микофлоры воздуха возле густого, высокого травостоя почти в 20 раз была выше, чем на открытом пространстве, где трава скошена. В основном количество нарастало за счет спор грибов рода Cladosporium. Количество осевших спор грибов Alternaria и Stemphylium не зависело от места забора пробы, споры же эдафитных грибов родов Aspergillus, Penicillium, Fusarium и Mucor, а также эпифитных дрожжеподобных грибов родов Trichophyton и Aureobasidium оседали только в определенном месте.
Изучение видового состава микобиоты продуктов пчел показало, что микобиота пыльцевой обножки на 66,7% отражает видовой состав микофлоры воздуха, перги — на 58,3%, меда — на 50,0% и меньше всего (33,3%) в прополисе, то есть можно заключить, что от питательных и физико-химических свойств субстрата зависит сохранность спор определенных видов микромицетов. Если в пыльцевой обножке доминировали (71,4%) споры грибов Cladosporium, то в прополисе доминировали (69,5%) Penicillium. В продуктах пчеловодства увеличивалось видовое разнообразие эдафитных грибов родов Aspergillus (5 видов) и Penicillium (3 вида). В микобиоте прополиса 83,3% приходилось на споры грибов этих родов, где основная доля (82,05%) принадлежала виду P. thomi. Кроме этого, идентифицированные в микофлоре воздуха виды Stemphylium botryosum, Mucor racemosus, Exserohilum rostratum, входящие в состав микобиоты обножки, перги и меда, не встречались в микофлоре прополиса. Поэтому можно сказать, что хотя на контаминацию продуктов пчел микофлора воздуха и оказывала влияние, но все же ее формирование зависит от свойств самого продукта (Г.П.Чекрыга, 2007). Количественная характеристика контаминации продуктов пчел микромицетами также подтверждает зависимость выживания спор от субстрата, в данном случае от вида продукта. Наибольшая численность микромицетов (392 КОЕ/г) выявлена в пыльцевой обножке, почти в 6 раз меньше в перге, меду и прополисе.
Сравнение видового состава микромицетов по Серенсену показало, что наибольшее сходство микобиоты воздуха наблюдается с микобиотой пыльцевой обножки (К=33), меда (К=30), перги (К=29) и микобиоты (К=21) прополиса.
В результате проведенной работы можно сделать выводы, что общим для изученных составов микобиоты продуктов пчел и воздуха пасеки ООО «Таежный мед» Залесовского района Алтайского края в конце июня 2007 г. является 100%-ная встречаемость вида Cladosporium cladosporioides, частота доминирования которого составила 60,0%.
Присутствие в пыльцевой обножке, перге, прополисе и меду таких видов, как Alternaria alternata, Stemphylium botruosum, Exserohilum rostratum, Mucor racemosus, Trichophyton terrestre, выделенных и в микофлоре воздуха, также подтверждает попадание микромицетов в продукты пчеловодства из воздуха.
Несмотря на то что загрязнение микромицетами продуктов пчеловодства тесно связано с нахождением их в воздухе, основным условием выживания спор являются свойства самого продукта.
Наибольшее видовое сходство микобиоты воздуха наблюдалось с микобиотой пыльцевой обножки (К=33), другими словами, микобиота пыльцевой обножки может служить индикатором, характеризующим микоценозы определенной местности, в данном случае места расположения пасеки.
Г.П.ЧЕКРЫГА, К.Я.МОТОВИЛОВ
Государственное научное учреждение
«Сибирский научно-исследовательский
и проектно-технологический институт переработки сельскохозяйственной продукции
СО Россельхозакадемии»
(ГНУ СибНИПТИП), Новосибирская обл., г. Краснообск
Адрес редакции журнала "Пчеловодство":
