Новые тест-системы для идентификации вирусов пчел в режиме реального времени

УДК 578.52

Медоносные пчелы (Apis mellifera) могут быть заражены различными патогенами (вирусами, бактериями, грибами) или поражены паразитическими клещами. Вирусы могут приводить к гибели пчел, что негативно отражается на производстве меда и опылении растений.

В последние годы обнаружено около 30 различных РНК-вирусов, поражающих пчел на разных стадиях развития. Они могут присутствовать в организме в скрытой форме, не вызывая явных признаков болезни, однако при определенных условиях влияют на здоровье пчел и сокращают жизнь инфицированных особей…

На территории одиннадцати областей европейской части России и в Красноярском крае с помощью ОТ-ПЦР исследовано распространение семи патогенных вирусов пчел: ABPV, BQCV, SBV, DWV, IAPV, KBV и CBPV. Были определены четыре самых распространенных вируса: ABPV, DWV, SBV, BQCV. Вирус CBPV обнаружен не был. Проведено секвенирование участков гена RdRp вирусов ABPV, BQCV, SBV, DWV, IAPV и KBV. На основе сравнительного анализа полиморфизма последовательностей участков гена RdRp с существующими в базах данных последовательностями из других регионов мира разработана тест-система для одновременного обнаружения наиболее распространенных пар вирусов ABPV, SBV и DWV, BQCV в одной пробирке с использованием методики ПЦР в режиме реального времени.

Ключевые слова: медоносные пчелы, вирус острого паралича, вирус деформации крыла, вирус черных маточников, вирус мешотчатого расплода, вирус хронического паралича, кашмирский вирус, израильский вирус острого паралича, RdRp (РНК-зависимая РНК-полимераза).

А.А. ШЕВЦОВА, В.А. БОЛЬШАКОВ, З.Г. КОКАЕВА, А.Ю. БЕРЁЗОВ, А.В. КОРОЛЕВ¹

МГУ им. М.В. Ломоносова, биологический факультет;
¹ФГБОУ ВО «Московская государственная академия
ветеринарной медицины и биотехнологии
им. К.И. Скрябина», г. Москва

ЛИТЕРАТУРА
1. Масленникова В.И., Климов Е.А., Королев А.В., Кокаева З.Г., Шевцова А.А. Оценка вирусной и клещевой нагрузки на пчелиные семьи в Белгородской области при массовой гибели пчел // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. — 2018. — №6.
2. Шевцова А.А., Большаков В.А., Кокаева З.Г., Королев А.В. Распространенность и полиморфизм патогенных вирусов пчел в России // Пчеловодство. — 2022. — №9.
3. Шевцова А.А., Королев А.В., Масленникова В.И., Кокаева З.Г., Березов А.Ю., Климов Е.А. Вирусная концепция гибели пчелиных семей на пасеках европейской части России // Бюллетень Московского общества испытателей природы. Отдел биологический. — 2021. — Т. 126. — №2.
4. Berényi O., Bakonyi T., Derakhshifar I., Köglberger H., Nowotny N. Occurrence of six honeybee viruses in diseased Austrian apiaries // Applied Environmental Microbiology. — 2006. — V. 72.
5. Lannutti L., Gonzales F.N., Santos M.J.D, Florin-Christensen M., Schnittger L. Molecular Detection and Differentiation of Arthropod, Fungal, Protozoan, Bacterial and Viral Pathogens of Honeybees // Veterinary Sciences. — 2022. — V. 9. — №5.
6. Leonard S.P., Powell J.E., Perutka J., Geng P., Heckmann L.C., Horak R.D., Davies B.W., Ellington A.D., Barrick J.E., Moran N.A. Engineered symbionts activate honey bee immunity and limit pathogens // Science. — 2020. — V. 367. — №6477.
7. Maori E., Paldi N., Shafir S., Kalev H., Tsur E., Glick E., Sela I. IAPV, a bee-affecting virus associated with Colony Collapse Disorder can be silenced by dsRNA ingestion // Insect Molecular Biology. — 2009. — V. 18. — №1.
8. Olgun T., Everhart S.E., Anderson T., Wu-Smart J. Comparative analysis of viruses in four bee species collected from agricultural, urban, and natural landscapes // PloS one. — 2020. — V. 15. — №6.
9. Remnant E.J., Shi M., Buchmann G., Blacquière T., Holmes E.C., Beekman M., Ashe A. A diverse range of novel RNA viruses in geographically distinct honey bee populations // Journal of Virology. — 2017. — V. 91. — №16.
10. Reynaldi F.J., Sguazza G.H., Tizzano M.A., Fuentealba N.A., Galosi C.M., Pecoraro M.R. First report of Israeli acute paralysis virus in asymptomatic hives of Argentina // Rev Argent Microbiol. — 2011. — V. 43.
11. Ullah A., Gajger I.T., Majoros A., Dar S.A., Khan S., Kalimullah H., Shah A., Khabir N.M., Hussain R., Khan H.U., Hameed M., Anjum S.I. Viral impacts on honey bee populations: A review // Saudi Journal of Biological Sciences. — 2021. — V.28. — №1.

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Шевцова Анна Александровна, аспирант кафедры генетики, e-mail: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript., тел. 8 (926) 081-98-81;
Большаков Вадим Александрович, магистр второго года кафедры структурной биологии, e-mail: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript., тел. 8 (915) 428-44-64;
Берёзов Александр Юрьевич, магистр первого года кафедры генетики, e-mail: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript., тел. 8 (916) 392-92-05;
Кокаева Зарема Григорьевна, канд. биол. наук, ст. науч. сотр. кафедры генетики, e-mail: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript., тел. 8 (916) 801-72-80;
Королев Александр Викторович, канд. с.-х. наук, доцент кафедры частной зоотехнии, e-mail: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript., тел. 8 (905) 547-74-63.

NEW TEST SYSTEMS FOR THE IDENTIFICATION OF BEE VIRUSES IN REAL-TIME MODE

A.A. Shevtsova, V.A. Bolshakov, Z.G. Kokaeva, A.Yu. Berezov, A.V. Korolev

On the territory of eleven regions in the European part of Russia and in the Krasnoyarsk Territory through RT-PCR, the prevalence of seven harmful bee viruses (ABPV, BQCV, SBV, DWV, IAPV, KBV, and CBPV) was studied. Four of the most common viruses have been identified: ABPV, DWV, SBV, BQCV. CBPV virus was not found. Sequencing of the regions of RdRp gene of ABPV, BQCV, SBV, DWV, IAPV and KBV viruses was performed. Using a comparative analysis of polymorphism in the RdRp gene sequences with global sequences from databases from different regions of the world, a test system to simultaneously detect the most common pairs of ABPV, SBV, and DWV, BQCV viruses in a single tube using real-time PCR has been developed.

Keywords: honeybee, acute bee paralysis virus, deformed wing virus, black queen cell virus, sacbrood virus, chronic bee paralysis virus, Kashmir bee virus, Israeli acute paralysis virus, RdRp (RNA-dependent RNA polymerase).

Поделиться с друзьями