Повсеместное распространение аскосфероза объясняется рядом причин, а именно: ухудшением экологической обстановки на планете; селекцией особенно вирулентных штаммов гриба Ascosphaera apis; неконтролируемым и неоправданным использованием антибиотиков и препаратов химической природы; кочевками пасек на значительные расстояния; генетическим изменением породности пчел и т.п. Ущерб, причиненный этим заболеванием, в отдельные годы огромен. На неблагополучных пасеках расплод может быть поврежден на 60–70%. Основа оздоровления пчелиных семей — четкое выполнение санитарных требований. Не менее важны также лечебные мероприятия, однако число препаратов отечественного производства против аскосфероза ограниченно. Для лечения пчел от этого заболевания используют препараты из медицинского арсенала — нистатин, нитрофунгин, леворин, в некоторых случаях трихопол и препараты из ветеринарной практики — аскоцидин, микоцидин, аскомат, аскоцин, аскомизол, апиколь, декабин, микосоль, некоторые органические кислоты, полиэновые антибиотики, декаметоксин и др.
Импортные препараты чаще всего дороги и недоступны пчеловодам. Поиск и апробация дешевых препаратов и веществ отечественного производства для лечения аскосфероза актуальны на сегодняшний день как никогда ранее.
В задачу наших исследований входили первичный отбор in vitro растительных и биоорганических веществ с ингибирующим в отношении гриба Ascosphaera apis эффектом и дальнейшая их проверка в естественных условиях на пчелиных семьях, больных аскосферозом. Параллельно мы изучали влияние названных веществ на естественное заражение пчелиных семей микроспоридией Nosema apis.
Мы испытывали разные концентрации двух веществ: ДГ-75 (производное пиридина) и ДЭ-8 (производное карбоновых кислот), а также вытяжку из корней лопуха Arctium majus Bernh. Для лабораторных опытов вытяжку из корней лопуха готовили спиртовую, а для опытов на пчелиных семьях в естественных условиях — водную.
Производные пиридина обладают фунгибактерицидной и рострегулирующей активностью.
Производные карбоновых кислот также обладают фунгибактерицидной активностью. Кроме того, некоторые из этой группы вещества имеют инсектицидные и рострегулирующие свойства.
В естественных условиях определили эффективность наиболее активных концентраций названных веществ в отношении пчелиных семей, больных аскосферозом. Схемой опыта предусматривались как самостоятельное использование ДЭ-8 и ДГ-75, так и совместное с экстрактом лопуха.
В подопытном пчеловодческом хозяйстве было 30 пчелиных семей, которых содержали в двухкорпусных ульях. В опыт отбирали равные по силе и степени заражения грибом A.apis: одна семья — один вариант. Подопытные семьи имели маток первого года использования. В начале опыта пчелы занимали в среднем по 10 улочек.
Степень заражения грибом определяли по методике В.Д.Бобова и В.Ф.Титова (1991). По этой методике считается слабым заражение пчел, когда на соте до 10 мертвых мумифицированных личинок, средним от 10 до 100, сильным — более 100 мертвых личинок. В нашем опыте преобладали семьи средней степени заражения. Мумифицированных личинок подсчитывали через три дня после первой и второй обработки. Мумии отбирали во время учетов для анализа характера спорообразования гриба. С этой целью обустраивали перед летками учетные площадки (почву очищали от травы и помещали на ней фанеру размером 50х30 см).
Степень заражения пчел микроспоридией N.apis определяли, используя трехбалльную шкалу О.Ф.Гробова и др. (1987). По этой методике слабым считается заражение, когда в поле зрения микроскопа (х 400–600) менее 10 спор; средним — 10–100 и сильным — более 100 спор в поле зрения. Анализировали гомогенат не менее 30 брюшек пчел, который готовили из расчета 10 брюшек на 1 мл дистиллированной воды. Мазки анализировали также на преобладающую микрофлору после специфического окрашивания на разные группы энтомопатогенов (Евлахова, 1964). Силу пчелиных семей, их медопродуктивность определяли по общепринятым методикам (Броварский, Багрий, 1995).
В лабораторных опытах использовали культуру гриба A.apis двухнедельного возраста. Питательной средой для возбудителя служило пивное сусло с добавлением 5% агара. Культивировали гриб в термостате при 28–30°С. Ингибирующее действие вышеназванных веществ изучали в чашках Петри на твердой агаризованной среде в трех повторностях при различных концентрациях препаратов. Объем питательной среды в чашках Петри 20 мл.
Данные лабораторных опытов по апробации разных концентраций ДЭ-8 и ДГ-75 в отношении культуры гриба A.apis показали, что препараты ДЭ-8 и ДГ-75 подавляли полностью рост и развитие гриба в широком диапазоне концентраций (%) (1; 0,5; 0,1; 0,05). Оба препарата в 0,01% концентрации подавляли рост гриба на 80–90%. Фунгицидная активность экстракта из лопуха была на уровне исследованных нами биоорганических веществ.
Гриб A.apis в обоих случаях на ранних этапах роста (4–5 сут инкубации) был более чувствителен к изучаемым веществам, чем на поздних (6–7 сут).
Изменение культурально-морфологических свойств имело одинаковый характер в обоих случаях как при использовании биоорганических веществ — ДЭ-8 и ДГ-75, так и растительного — экстракта из лопуха. У возбудителя аскосфероза опаздывало или не наступало спорообразование, мицелий увлажнялся, становился более тонким. Колонии гриба лизировались, становились аморфными и сморщивались.
Таким образом лабораторные опыты позволили отобрать вещества с высоким фунгицидным эффектом и определить наиболее активные их концентрации, которые апробировали в естественных условиях на пчелиных семьях, больных аскосферозом. Схема опыта была следующей. Вариант 1 — скармливание сахарного сиропа (50%) без лечебных препаратов (контроль). Вариант 2 — скармливание сахарного сиропа с препаратом ДГ-75. Вариант 3 — скармливание сахарного сиропа с препаратом ДЭ-8. Вариант 4 — скармливание сахарного сиропа, приготовленного на водной вытяжке из корней лопуха. Вариант 5 — скармливание сахарного сиропа, приготовленного на водной вытяжке из корней лопуха с добавлением препарата ДЭ-8.
Уменьшение числа мумифицированных личинок пчел под действием скармливания вышеназванных препаратов больным аскосферозом пчелиным семьям представлено в таблице 1. В контроле число мумий на протяжении июля возрастало в два раза, в то время как с лечебными препаратами этот показатель значительно уменьшался, а в варианте с ДГ-75 и лопухом (вар. 2, 4) в конце июля мумифицированные личинки исчезли вообще. Препарат ДЭ-8 был наименее эффективен из апробированных. При совместном скармливании лопуха с ДЭ-8 (вар. 5) лечебный эффект обусловливался в основном действием лопуха.
Характер спорообразования гриба A.apis напрямую зависел от применяемого вещества (табл. 2).
Наиболее выражено спорообразование в контрольной семье (споры — наиболее массовый источник распространения инфекции). Спорообразование подавлялось в варианте с лопухом как при самостоятельном его использовании (14,2%), так и совместно с препаратом ДЭ-8 (8,3–13,3%). В этих вариантах наблюдалось угнетенное спорообразование. Тут доминировали вегетативные стадии развития A.apis (белые мумии) (85,8–91,7%), которые не являются массовым источником инфекции.
Таким образом, экстракт из лопуха и апробированные нами препараты биоорганического происхождения высокоэффективны для лечения пчел от аскосфероза. Наиболее эффективен и доступен лопух обыкновенный. Его можно использовать совместно с другими препаратами, в частности с ДЭ-8. Достаточно эффективным противоаскосферозным препаратом может быть ДГ-75.
В наших опытах изученные вещества не влияли на силу пчелиных семей. Мы связываем этот факт с их биологическими особенностями. Наряду с этим использование исследуемых веществ оказало положительное влияние на медопродуктивность семей (табл. 3) и их зимовку. Меньше подмора было в семьях, где использовали ДГ-75 и лопух. При совместном применении ДЭ-8 и лопуха наблюдался такой же эффект, как и при использовании одного лопуха.
Только в варианте с применением ДГ-75 в мертвых пчелах отсутствовали споры микроспоридии N.apis, что, с нашей точки зрения, свидетельствует о противонозематозном эффекте этого препарата. Клещ Varroa jacobsoni в незначительных количествах присутствовал во всех вариантах опыта (1,5–3%). Микроскопический анализ кишечников живых пчел, отобранных в марте из подопытных семей, свидетельствует о противонозематозном эффекте препаратов ДГ-75 и ДЭ-8. В этих вариантах на мазках из кишечников пчел споры N.apis отсутствовали. В вариантах с лопухом у пчел была низкая степень заражения, а у пчел в контроле — средняя.
Таким образом, исследованные нами вещества (экстракт из корней лопуха, ДГ-75 и ДЭ-8) имели выраженный противоаскосферозный эффект. Наиболее эффективным и наиболее доступным в отношении лечения аскосфероза пчел был экстракт из корней лопуха. Вещество ДГ-75 (производное пиридина) может быть высокоэффективным лечебным препаратом при аскосферозе пчел. Его можно также использовать для профилактики зимне-весеннего обострения нозематоза пчел. Вещество ДЭ-8 (производство карбоновых кислот) наименее эффективно при аскосферозе пчел. Эффект от совместного использования ДЭ-8 с лопухом вероятнее всего обусловлен действием лопуха. Сила семей в наших опытах не зависела от лечебных свойств исследованных нами веществ. Медопродуктивность и качество зимовки подопытных семей в определенной степени обусловливались действием препаратов и были наилучшими в вариантах с лопухом и ДГ-75.
Учитывая данные, полученные в лабораторных и естественных условиях, мы предварительно рекомендуем использовать вытяжку из корней лопуха как высокоэффективное лечебное и профилактическое средство при аскосферозе у пчел. Вещество ДГ-75 может быть рекомендовано как основа препарата с комплексным противоаскосферозно-нозематозным эффектом.
Т.М.ЕФИМЕНКО, В.И.ДАХНОВСКИЙ,
Л.И.БОДНАРЧУК, П.Г.ДУЛЬНЕВ
Институт пчеловодства им. П.И.Прокоповича,
Академия аграрных наук,
Институт биоорганической химии и нефтехимии,
Национальная академия наук Украины
Адрес редакции журнала "Пчеловодство":
